IMViC test (ایندول، متیل رد، وگس پرسکوئر و معرف سیترات)
مقدمه
شناسایی باکتری هایی که شامل گروه کلیفرم هستند گاهی برای تعیین ماهیت آلودگی غذا یا آب ضروری است. آزمایشهای افتراقی برای شناسایی باکتریهای فوق باید با این آگاهی انجام گیرد، که تمام سویه های طبقه بندی شده که به گروه کلیفرم نسبت داده شده ضرورتا نمی تواند با تعریف اعلام شده در این دستور کار کاملا مطابقت داشته باشد. زیرا برخی از باکتریها ممکن است لاکتوز را تخمیر نکنند و یا در صورت تخمیر گاز تولید نکنند. علاوه بر این باکتریهای گرم منفی دیگر بجز کلیفرم ها، لاکتوز را تخمیر کرده و روی محیط کشت تولید درخشش می کنند(نظیر گونه های آئروموناس). اما تمام سویه های یک گونه واکنش یکسانی در محیط کشت نخواهند داشت. ارگانیسم ها جهش یافته، صدمه دیده و تغییر پذیر ممکن است به آزمایش ها پاسخ متفاوتی بدهند. هر چند آزمایش های متداول IMViC (یعنی ایندول، متیل رد، وگس پرسکوئر و معرف سیترات) برای تشخیص افتراقی کلیفرم ها مفید است اما شناسایی کاملی را فراهم نکرده و برای دستیابی به نتایج دقیق به آزمایش های بیوشیمیایی بیشتری نیاز است.
روش آزمایش های تشخیص افتراقی(IMViC)
آزمایش ایندول
مقدمه: ایندول محصول متابولیسم تریپتوفان است. آنزیم تریپتوفاناز، تریپتوفان موجود در پپتون و سایر ترکیبات محیط کشت را به ایندول، اسکاتول و ایندول استیک اسیدتبدیل می کند.
مواد و وسایل موردنیاز:
1-محیط کشت تریپتوفان براث
2-معرف کواکس(پارا دی متیل آمینو بنزآلدئید. معرف باید زردرنگ بوده و PH کمتر از 6 باشد.
3-لوله های آزمایش و جالوله ای و پلیت
4-منبع حرارت، آنس یا لوپ، پیپت و پوآر
روش انجام آزمایش:
1-پس از برداشتن یک کلنی از محیط کشت EMB آن را در لوله های حاوی محیط کشت تریپتوفان براث وارد می کنیم.
2-به مدت 24 ساعت در انکوباتور 35 درجه سانتی گراد قرار می دهیم.
3-در پایان این مدت به هر لوله 0.2 تا 0.3 میلی لیتر محلول معرف (واکنش گر) اضافه نموده و تکان می دهیم، 10 دقیقه صبر کرده و سپس نتایج را مشاهده می کنیم.
4-تشکیل رنگ قرمز در لایه سطحی آمیل الکل، نشاندهنده پاسخ مثبت به آزمایش ایندول است. در صورتی که رنگ اصلی محلول حفظ شده باشد نتیجه آزمایش ایندول منفی است. رنگ نارنجی احتمالا نشان دهنده حضور اسکاتول ناشی از تجزیه ایندول می باشد.
در آزمایش ما هاله قرمز بر روی محیط کشت تشکیل شد که این نشان دهنده مثبت بودن نتیجه آزمایش ما بود.
آزمایش متیل رد
تئوری آزمایش: این آزمایش PH نهایی را اندازه گیری می کند، یعنی به بررسی تولید اسید حاصل از تجزیه گلوکز به وسیله باکتریها می پردازد.واکنش های متابولیکی که به وسیله تولید گاز و آزمایش های متیل رد و وکس پرسکوئر مشخص می گردد، با یکدیگر بستگی داشته و در شناسایی افتراقی اعضای گروه کلیفرم مفیدند.
مواد و وسایل موردنیاز:
1-محیط کشت MRVP
2-معرف متیل رد(که به صورت آماده وجود دارد)
3-لوله های آزمایش و جالوله ای و پلیت
4-منبع حرارت، آنس یا لوپ، پیپت و پوآر
روش انجام آزمایش:
1- ابتدا محیط MRVP را طبق دستورالعمل کارخانه سازنده آماده و استریل می نمائیم.
2-ابتدا یک آنس از باکتری را در لوله حاوی محیط کشت MRVP کشت داده و نمونه ها را در انکوباتور35 درجه سانتیگراد قرار می دهیم.
3-پس از 3 تا 5 روز گرماگذاری، به هر لوله 5 قطره محلول شناساگر قرمز متیل اضافه می کنیم.
4-مشاهده رنگ قرمز مشخص بیانگر پاسخ مثبت به آزمایش متیل رد و رنگ زرد واضح بیانگر پاسخ منفی برای آزمایش متیل رد است. سایه ی رنگی مبهم و نامشخص به عنوان نتیجه مشکوک و احتمالا عدم خالص سازی درست کشت میکروبی می باشد.
5- با بررسی روزانه کشت های میکروبی (در روزهای4،3،2 و یا 5) گاه می توان موارد مثبت را زودتر از موعد مشاهده نمود.
نتیجه آزمایش ما منفی بود و رنگ قرمز تشکیل نشد.
آزمایش وگس پرسکوئر
برای تمایز بین باسیل های گرم منفی روده ای به کار می رود که توانایی آنزیمی باکتری برای تولید محصولات غیر اسیدی یا خنثی از تجزیه گلوکز می باشد.
تئوری آزمایش :
این آزمایش برای تعیین استوئین که به صورت متابولیکی به وسیله برخی از باکتریهای کلیفرم در محیط پپتون-گلوکز تولید می شود، پیشنهاد شده است.
مواد و وسایل موردنیاز:
1-محیط کشت MRVP
2-هیدروکسیدپتاسیم 40 درصد و آلفا نفتول (معرف باریت)
3-لوله های آزمایش و جالوله ای و پلیت
4-منبع حرارت، آنس یا لوپ، پیپت و پوآر
روش انجام آزمایش :
1-ابتدا محیط MRVP را طبق دستورالعمل کارخانه سازنده آماده و استریل می نمائیم.
2-از کلنی های باکتری در محیط EMB یک آنس برداشته و در محیط MRVP کشت می دهیم.
3-به مدت 48 ساعت در دمای 35 درجه سانتی گراد قرار داده در پایان مدت به یک میلی لیتر از محیط کشت میکروبی 0.6 میلی لیتر محلول آلفا نفتول و 0.2 میلی لیتر محلول پتاس 40 در صد اضافه می کنیم. همه این اعمال در نزدیک شعله صورت میگیرد .
4- تشکیل رنگ صورتی تا قرمز لاکی ظرف 5 دقیقه بیانگر پاسخ مثبت به آزمایش است.
5-از خواندن رنگ بعد از مدت 5 دقیقه اجتناب می کنیم. همچنین لوله هایی که در آنها رنگ مسی تشکیل شده را کنار می گذاریم.
نتیجه آزمایش ما منفی بود و رنگ قرمز تشکیل نشد .
آزمایش سیترات سدیم
تئوری آزمایش: این آزمایش توانایی باکتریها در مصرف سیترات به عنوان تنها منبع کربن را بررسی میکند.
سیترات طی یک واکنش آنزیمی به اسید پیروئیک وCo2 تبدیل می شود. در طی این واکنش PH محیط کشت به دلیل ترکیب Co2 با سدیم موجود در محیط کشت و تولید کربنات سدیم بازی می شود. خود محیط کشت به شکل سبز رنگ است که به دلیل وجود معرف کروموتیمول بلو می باشد که در صورت حضور کربنات سدیم به رنگ آبی لاجوردی تبدیل می شود.
مواد و وسایل موردنیاز:
1-محیط کشت سیمون سیترات
2-لوله های آزمایش، جالوله ای و پلیت
3-منبع حرارت، آنس یا لوپ، پیپت و پوآر
روش انجام آزمایش:
1-ابتدا محیط سیمون سیترات آگار را طبق دستورالعمل کارخانه سازنده آماده و استریل می نمائیم.
2-از کلنی های مشخص در محیط EMB توسط آنس سوزنی برداشته و در محیط کشت شیبدار سیمون سیترات به صورت عمقی و سطحی کشت داده و به مدت 24 تا 48 ساعت در انکوباتور در دمای 35 درجه سانتیگراد قرار می دهیم.
3-رشد روی محیط که معمولا به رنگ آبی است(یا کدر شدن محیط کشت) به عنوان پاسخ مثبت و عدم رشد را به عنوان پاسخ منفی در نظر میگیریم. که آزمایش ما منفی بود.
آزمایش حرکت:
تئوری آزمایش: بررسی حرکت باکتریها در محیط هایی مثل SIM یا موتیلیتی مدیوم انجام می گیرد. به علت اینکه این محیط دارای آگار حدود 2.5 تا 3.5 در هزار می باشد، باکتری هایی که دارای تاژک هستند قادر به نفوذ در بین مواد این محیط خواهند بود. بنابراین اگر با آنس سوزنی باکتری را بطور عمودی در این محیط ها فرو ببریم و کشت بدهیم، چون این دو محیط بصورت آگار تال تهیه می شوند، اگر باکتری تاژه داشته باشد در رد آنس چیزی مشاهده نمی گردد و تمامی محیط کدر می شود که این کدورت بستگی به نوع باکتری از نظر تعداد تاژه دارد.
مواد و وسایل موردنیاز:
1-محیط های کشت SIM یا موتیلیتی مدیوم
2-لوله های آزمایش، جالوله ای و پلیت
3-چراغ الکلی، آنس ، پیپت و پوآر
روش انجام آزمایش:
1-ابتدا محیط SIM را طبق دستورالعمل کارخانه سازنده آماده و استریل می نمائیم.
2-یک آنس از محیط کشت باکتری در محیط EMB برداشته و در سطح بالایی محلول کشت تا عمق 5 میلیمتر تلقیح را انجام می دهیم. سپس لوله ها را به مدت 1 تا 2 روز در 35 درجه سانتیگراد قرار می دهیم، اگر پس از این مدت پاسخ منفی بود، 5 روز دیگر در دمای 22 تا 25 درجه سانتیگراد در این دما قرار می دهیم.
3-مشاهده رشد انتشار یافته در محیط کشت از نقطه فرو بردن آنس سوزنی بیانگر پاسخ مثبت است.
آزمون تولید سولفیت هیدروژن (H2S)
توانایی باکتری ها در تولید سولفیت هیدروژن از ترکیباتی که داراری گوگرد هستند مورد بررسی قرار می گیرد . برای این منظور از محیط کشت SIM استفاده می شود و به دلیل وجود تیوسولفات سدیم و سولفات آهن دوبار مثبت در صورت وجود H2S ترکیب شده و رسوب سولفیت آهن سیاه رنگ رنگ می دهد.
تشکیل نقاط سیاه رنگ در امتداد خط شیار انس نشانه مثبت بودن تولید سولفیت و عدم تشکی رنگ سیاه نشانه عدم تولید H2S است.
اهمیت اقتصادی و کاربردی جلبک های میکروسکوپی - یکشنبه بیست و دوم خرداد 1390
استاندارد ISO 14001 - یکشنبه بیست و دوم خرداد 1390
آب در اسطوره - یکشنبه بیست و دوم خرداد 1390
راهکاری نوین برای حفظ محیط زیست از سموم صنعتی - یکشنبه بیست و دوم خرداد 1390
آلودگی آب شرب و اهمیت تصفیه - یکشنبه بیست و دوم خرداد 1390
قنات حفظ پایداری محیط زیست - یکشنبه بیست و دوم خرداد 1390
بهبود روش های مصرف آب - یکشنبه بیست و دوم خرداد 1390
جریان آب زیرزمینی - یکشنبه بیست و دوم خرداد 1390
باران های اسیدی و باران های قلیایی - یکشنبه بیست و دوم خرداد 1390
قنات و قنات داری در ایران - یکشنبه بیست و دوم خرداد 1390
عوامل موثر در پایداری سدها - یکشنبه بیست و دوم خرداد 1390
گزارشی از اقداماتی جهانی و بومی برای مدیریت ذخایر آب - شنبه بیست و یکم خرداد 1390
گزارشی از برنامه هایی برای سناریوهای بحران آب در جهان - شنبه بیست و یکم خرداد 1390
شاخص های کیفیت فاضلاب - جمعه بیستم خرداد 1390
اخلاق محیط زیست - جمعه بیستم خرداد 1390
گرم شدن کره زمین و بحران های آب - پنجشنبه نوزدهم خرداد 1390
مدیریت منابع آب و مقابله با خشکی در کشاورزی - پنجشنبه نوزدهم خرداد 1390
مشکلات زیست محیطی ناشی از شوینده ها - دوشنبه شانزدهم خرداد 1390
اطلاعاتی پیرامون آب آشامیدنی، دستگاه های تصفیه آب کوچک ودستگاه های سختی گیر از آب - دوشنبه شانزدهم خرداد 1390
مضرات آب های آشامیدنی در بطری - دوشنبه شانزدهم خرداد 1390
مشکلات پالایش آب شور - دوشنبه شانزدهم خرداد 1390
مقایسه آب لوله شکی و آب بطری شده و روش های تصفیه خانگی و مشکلات آن ها - دوشنبه شانزدهم خرداد 1390
آشنایی با روز جهانی محیط زیست - یکشنبه پانزدهم خرداد 1390
خوردگی آهن - یکشنبه پانزدهم خرداد 1390
عوامل موثر بر حلالیت اکسیژن در آب - یکشنبه پانزدهم خرداد 1390
فرآيند خوردگي فلزات - یکشنبه پانزدهم خرداد 1390
سيستم مديريت زيست محيطي ISO 14000 - جمعه سیزدهم خرداد 1390
مديرعامل شركت فاضلاب تهران: اجراي شبكه فاضلاب داخل منازل بر عهده مالكان است - پنجشنبه دوازدهم خرداد 1390
تعیین دبی آب - پنجشنبه دوازدهم خرداد 1390
آلودگی ناشی از رستورانهای فاقد سیستم فاضلاب در منابع آب شرب تهران - پنجشنبه دوازدهم خرداد 1390
اثر مواد جامد محلول (TDS) آب بر عملکرد جوجه های گوشتی - پنجشنبه دوازدهم خرداد 1390
فرایندهای غشایی - الکترودیالیز - پنجشنبه دوازدهم خرداد 1390
نيتريت و نيترات در آب آشاميدني و راه های حذف آنها - پنجشنبه دوازدهم خرداد 1390
سختي آب (Hardness Water) - پنجشنبه دوازدهم خرداد 1390
تصفیه پساب های نیروگاهی - سه شنبه دهم خرداد 1390
باسيلوس سوبتيليس - سه شنبه دهم خرداد 1390
تک یاخته ای انتاموبا کولی (Entamoeba coli) - سه شنبه دهم خرداد 1390
شناسايى اشريشيا کلي - سه شنبه دهم خرداد 1390
تشخیص استافیلوکوکوس ها - سه شنبه دهم خرداد 1390
انتروکوک ها(استرپتوكوك فكاليس) - سه شنبه دهم خرداد 1390
تصفیه خانه آب گرمسار - سه شنبه دهم خرداد 1390
كمبود آب بحران ۲۰۲۵ - دوشنبه نهم خرداد 1390
روش اندازه گيري يون فلزات در آب و فاضلاب بوسيله اسپكتر فتومتر جذب اتمي - دوشنبه نهم خرداد 1390
چالش های آینده تصفیه خانه های آب شهری - یکشنبه هشتم خرداد 1390
تصفیهٔ آب با استفاده از امواج مافوق صوت - یکشنبه هشتم خرداد 1390
تهران و مشکل فاضلاب - یکشنبه هشتم خرداد 1390
بیماریهای منتشره توسط آب استخر - یکشنبه هشتم خرداد 1390
آلومینیوم در آب - یکشنبه هشتم خرداد 1390
علل خوردگی در سیکل آب و بخار - یکشنبه هشتم خرداد 1390
موارد بکارگیری روش ضدعفونی با اشعه uv - جمعه ششم خرداد 1390